Tiempo de Protrombina
Introducción.
La protrombina tiene un peso molecular aproximado de 75000. La protrombina es una & - 1 globulina que se sintetiza en el hígado y requiere para su síntesis a la vitamina K.
Esta prueba mide la actividad coagulante del sistema extrínseco incluyendo fibrinógeno, protrombina y factores V, VII, y X. además permite registrar los efectos de anticoagulantes y también se emplea en el diagnostico de trastornos de la coagulación congénitos y adquiridos.
Fundamento
Cuando el calcio y un extracto del tejido del cerebro (factor III, fosfolípidos y proteínas y que constituyen en una tromboplastina completa) son añadidos al plasma, inmediatamente el factor VII reacciona con el factor tisular para formar un complejo el cual transforma el factor X en su forma activada Xa; este reacciona con el factor V, calcio y los fosfolípidos presentes en el extracto del tejido para dar origen a la protrombinasa extrinseca, la cual transforma a la protrombina en trombina, esta convierte al fibrinógeno en fibrina.
La velocidad de formación de la fibrina depende e la concentración de los factores V, VII y X, protrombina, fibrinógeno, por lo tanto la prueba valora la actividad de la totalidad de estos factores, es decir, los que participan en la via extrínseca, excepto el factor VIII.
Esta prueba mide la cantidad de complejo protrombinico existente en el plasma, cuando se hace reaccionar dicho complejo con una cantidad conocida de tromboplastina y cloruro de calcio.
Objetivos
|
Tubos de ensayo con citrato de sodio 3.8%
Baño María con termostato
Pipeta serológica 0.1 ml
Pipeta serológica de 0.1 ml
Pipeta serológica de 0.5 ml
Pipeta Pasteur con bulbo
Gradilla
Cronometro
Jeringa o equipo vacutainer
|
|
Anticoagulante
Citrato de sodio al 3.8% CaCl2 0.02M
Tromboplastina activada
|
Evaluar el tiempo de protrombina en plasmas normales y patológicas.
Técnica:
- se toman 2.5 ml de sangre por punción venosa y se vierten en el tubo con anticoagulante de citrato de sodio al 38%. Se invierte para mezclarlos. Se centrifuga durante 5 minutos a 2000 rpm y se separa el plasma y se mantiene en refrigeración hasta el momento de hacer la prueba
- homogenizar correctamente reactivo de tromboplastina.
- transferir a un tubo la cantidad de de cloruro de calcio suficiente para el numero de pruebas a efectuar y mantenerlo a una temperatura de 37 oC en el baño de incubación.
- añadir 0.1 ml de plasma a un tubo e incubar durante 2 minutos.
- posteriormente agregar 0.1 ml de tromboplastina activada (previamente incubada durante 10 minutos) y colocar la mezcla en el baño de incubación 37 0C.
- agregar 0.1ml de cloruro de calcio .02 M ala mezcla de plasma y tromboplastina y simultáneamente poner en marcha el cronometro.
- agitar inmediatamente la mezcla y mantener en el baño de incubación a 37 oC. Es necesario revisar constantemente la apariencia de la mezcla y para ello se debe contar con buena iluminación para observar oportunamente la aparición de los primeros filamentos de fibrina; este es el momento final de la prueba y se detiene la marcha del cronometro.
- se extraen los tubos y se mantiene cerca de una fuente luminosa, se inclina suavemente 1 o 2 veces y se observa la formación de los primeros filamentos de fibrina que indica el punto fina. Deteniendo en este momento el cronometro.
